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RNA沉默抑制子p19调控细胞周期相关蛋白表达-代发表论文
番茄丛矮病毒的P19蛋白不仅是一个重要的病毒致病因子,而且还可作为RNA干扰(RNAi)的抑制子.这种作用是通过限制细胞内的小RNA,比如小干扰RNA(siRNAs)和微RNA(miRNAs)来实现.但是目前对P19蛋白在哺乳动物细胞上的作用还未见报道.构建了一株p19稳定表达的293细胞系,即293-p19.流式细胞仪分析发现在293细胞中过量表达P19蛋白可显著引发细胞周期的G2/M阻滞.细胞增殖实验显示,293-p19细胞的DNA复制及细胞生长均受到显著的抑制.此外,研究还发现p19可使人胚肾293细胞内的细胞周期调控子的表达谱发生改变.其中包括上调cyclinA1,CDK2,CDK4,CDK6,p18,cyclinD2,p19INK4d和E2F1,及下调p15,cyclinA,cyclinB1和cyclinE1的表达.上述研究结果提不,p19有可能靶向多个G2/M调控蛋白从而引发细胞的G2/M阻滞.Besidesitsfunctionasapathogenicitydeterminant,theTombusvirusP19alsoservesasasuppressorofRNAinterference(RNAi)bysequesteringintracellularsmallRNAssuchasthesmallinterferingRNAs(siRNAs)andmicroRNAs(miRNAs).However,theeffectofP19onmammaliancellshasnotbeenevaluatedbefore.Ahumanembryonickidney293celllinethatstablyexpressedp19(HEK293-p19)wasgenerated.Flowcytometricanalysisrevealedthatover-expressionofP19causedasignificantaccumulationofG2/Mphasecells.CellproliferationassaysdemonstratedareducedDNAreplicationandcellgrowthinHEK293-p19cells.Moreover,p19alteredtheexpressionprofilesofanumberofcellcycleregulatorsinHEK293cells,suchasupregulafionofcyclinA1,CDK2,CDK4,CDK6,p18,cyclinD2,p19INK4dandE2F1,anddownregulationofp15,cyclinA2,cyclinB1andcyclinE1.Thus,thedatastronglyindicatethatp19mightinfluencemultipleG2/MregulatorstocauseG2/Marrest.
 
所在期刊:《生物化学与生物物理进展》
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